TEM检测方案
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线粒体(外文名:mitochondrion)是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器,是细胞中制造能量的结构,是细胞进行有氧呼吸的主要场所,被称为"power house"
线粒体的形态和数量跟生物体的病理有着密切的关系,所以可以研究线粒体入手来研究其病理状态。
要观察动物的线粒体制样是关键,一般采用灌流后再从生物体来取样,灌流的效果会直接影响后面上机拍摄的效果,取样后包埋、切片和双染就可以上机测试了
灌注固定大概流程: 麻醉—开胸—心脏左心室穿针、剪开右心耳—注入生理盐水—注入4%多聚甲醛固定—取样—保存或切片。
灌流固定具体流程:在小鼠的大腿部位注射麻醉剂(如1% Pento-barbitone约0.2ml)麻醉后将小鼠的四肢固定在手术木板上,置于解剖盘中,剖开小鼠胸口,小心并迅速切开肋骨,剪去横膈膜,暴露并游离出心脏,
用止血钳轻轻夹紧心脏尖端,在左心室插入灌流针,止血钳夹紧,再切开右心耳放血,先灌注冷冻(常温)无菌生理盐水(4℃),直到肝、肺和眼珠颜色转至白色及右心房流出液澄清,再灌注冷冻(4℃)4%多聚甲醛,再取下采样的组织于多聚甲醛浸泡固定24小时。
如取脑组织的话:
灌流后剪断小鼠颈部,取下小鼠的脑袋,剪开小鼠头部皮层,露出头骨,用锋利的剪刀在小鼠颈部的肌肉去除,然后把左右部位用剪刀各剪一刀,然后从小鼠颅骨中线剪开,露出大脑,再用专用的取脑工具将小鼠脑袋取出,取出的时候要小心,避免损伤脑组织。
注意事项: