TEM检测方案
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植物组织的取材比较容易,植物细胞离体后变化不象动物细胞那样迅速,但植物细胞的细胞壁阻碍着固定液的迅速渗透。因此,植物材料的取材宜先切成薄片状,经适当固定后再切成小方块。
如组织含有较多空气,不易下沉浸入固定液,可以使用真空泵抽气方式使之下沉。
1.取材固定:
2.后固定:
(1)室温条件使用0.1MPB缓冲液冲洗样品3次,15min/次;
(2)在冰盒上使用还原性锇酸(1%锇酸+1.5%亚铁氰化钾)后固定样品1h。
3.铀染:
(1)室温条件使用0.1MPB缓冲液冲洗样品3次,15min/次;
(2)室温条件使用去离子水清洗样品3次,5min/次;
(3)室温条件使用1%铀染液孵育1h或4℃过夜;
(4)室温条件去离子水清洗样品3次,15min/次。
4.梯度脱水:
5.渗透:室温条件使用摇床
6.包埋固化:
7.修块切片染色:
1.取材需迅速,避免因组织离体后带来的自溶现象。
2.器械需锋利,避免挤压和牵拉组织。
3.样品制备过程中需始终处于试剂中。
4.更换试剂时要迅速且充分,无其他试剂残留。